盘状结构域受体2在大鼠酒精性肝纤维化模型中的表达

目的 观察盘状结构域受体2(DDR2)在大鼠酒精性肝纤维化不同病理阶段的表达情况,揭示DDR2在酒精性肝纤维化发生、发展中的作用.方法 橄榄油拌平衡饲料喂养大鼠的基础上给予60%(V/V)白酒胃内灌注,制备酒精性肝纤维化模型,分别于12、16、20周末观察肝脏病理学改变,并检测血清学指标和肝纤维化指标,荧光定量-PCR和Western blot检测肝组织DDR2基因和蛋白表达并与各项酒精性肝纤维化评价指标进行相关性分析.结果 (1)白酒灌胃后DDR2 mRNA和蛋白表达量随造模时间延长而增加,对照组DDR2 mRNA和蛋白表达分别为1.023±0.132、0.321±0.027,模型1组为3.644±1.686、0.476±0.046,模型2组为8.337±2.387、0.738±0.057,模型3组为15.730±4.569、0.997±0.049,四组之间DDR2 mRNA水平(F=21.74,P<0.01)及蛋白质表达(F=10.38,P<0.01)差异有统计学意义.(2)相关性分析显示酒精性肝纤维化形成过程中,DDR2与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原面积及血清透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原蛋白水平等均呈显著正相关,其中与Ⅲ型胶原、透明质酸、Ⅳ型胶原蛋白关系最为密切.结论 随酒精性肝纤维化进展,DDR2表达呈时间依赖性,提示其在酒精性肝纤维化的发生和进展中发挥重要作用.     

醛固酮在乳鼠心肌细胞表达肿瘤坏死因子-α中的作用

目的:观察醛固酮对培养心肌细胞表达肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。方法:在原代培养的新生大鼠心肌细胞,采用免疫组化和RT-PCR,评价10-6M、10-5M醛固酮及10-5M醛固酮拮抗剂螺内酯对心肌细胞表达TNF-α的影响。用凝胶滞留实验(EMSA)验证NF-κB是否参与TNF-α的转录调控,筛选TNF-α可能启动子的位点。结果:TNF-α的免疫组化染色在对照组心肌细胞呈阴性,10-5和10-6M醛固酮作用心肌细胞48h,心肌细胞胞浆中出现棕色颗粒,10-5M醛固酮与螺内酯共同孵育的心肌细胞内TNF-α染色呈阴性。与单纯培养的对照组心肌细胞相比,10-5M,10-6醛固酮刺激心肌细胞24h致心肌细胞TNF-α表达的mRNA显著增高,与螺内酯共同培养的心肌细胞中TNF-αmRNA水平与对照组相比没有明显差异。醛固酮组心肌细胞的核蛋白与TNF-α上游含有潜在NF-κB结合位点的2段寡核苷酸(-619~-591 and-508~-481)的结合强于对照组,螺内酯能阻断这一效应。结论:正常情况下培养的新生鼠心肌细胞内无TNF-α合成,醛固酮通过醛固酮受体促使培养的心肌细胞表达TNF-α,NF-κB核转移是醛固酮激活心肌细胞表达TNF-α的一条通路。     

替米沙坦对腹主动脉缩窄大鼠内质网应激相关的心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂替米沙坦对腹主动脉缩窄术后大鼠内质网应激相关的心肌细胞凋亡的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=10),腹主动脉缩窄组(n=10),腹主动脉缩窄+替米沙坦组(n=10).术后10周各组大鼠用导管法测量血液动力学指标并留取心肌标本测左心室质量指数,心肌细胞凋亡用TUNEL法检测,心肌内质网应激信号通路分子GRP78、CHOP用免疫印迹法和免疫组化法检测.结果 (1)腹主动脉缩窄组左心室质量指数(3.29±0.19)mg/g明显高于假手术组(2.17±0.22)ms/g(P<0.01),左心室舒张末压(9.71±0.52)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)亦明显高于假手术组(2.79±0.13)mm Hg,左心室收缩末压(105.61 ±6.66)mm Hg明显低于假手术组(135.02 ±5.95)mm Hg(P<0.01),而腹主动脉缩窄+替米沙坦组上述指标分别为(2.34 ±0.08)mg/g、(4.70±0.36)mm Hg、(127.62 ±4.99)mm Hg,明显优于腹主动脉缩窄组(P<0.01).(2)腹主动脉缩窄+替米沙坦组心肌细胞凋亡指数(13.42 ±0.74)%显著低于腹主动脉缩窄组(35.51 ±0.65)%(P<0.01).(3)腹主动脉缩窄组内质网应激信号分子GRP78、CHOP蛋白表达RGRP78/β-actin 0.436 ±0.007、RCHOP/β-actin 0.747±0.034显著高于假手术组RGRP78/β-actin 0.144±0.009、RCHOP/β0.316 ±0.007(P<0.01),而腹主动脉缩窄+替米沙坦组GRP78、CHOP(RGP78/β-actin 0.213±0.007、RCHOP/β0.451 ±0.019),明显低于腹主动脉缩窄组(P<0.01).结论 内质网应激参与了腹主动脉缩窄术后大鼠心肌细胞凋亡,替米沙坦对内质网应激相关的心肌细胞凋亡有保护作用.     

连接蛋白37基因I1297D多态性与中国北方汉族人群早发冠心病的相关性

目的探讨连接蛋白37基因I1297D多态性与早发冠心病的关系。方法采用聚合酶链反应—限制片长多态性技术,对196例经冠状动脉造影证实的早发冠心病患者和218例健康对照者进行检测,分析连接蛋白37基因I1297D多态性的基因型和等位基因频率分布情况。结果连接蛋白37基因I1297D多态性在冠心病组以ID基因型为主,对照组以II基因型为主,两组中均以DD基因型和D等位基因为少见型。基因型(II型,ID型和DD型)分布频率在早发冠心病组分别为44.39%、47.45%和8.16%,在对照组分别为47.71%、44.04%和8.25%,两组间比较差异无统计学意义(χ2=0.51,P=0.77)。等位基因分布在人群中以I等位基因为主,两组间分布频率相似(68.11%比69.72%,P=0.62,OR=0.93,95%可信区间为0.70~1.24);D等位基因携带者(ID DD)在冠心病组和对照组分别为55.61%和52.29%,与II纯合子相比,冠心病的患病风险在两组间差异无统计学意义(χ2=0.46,P=0.50,OR=0.87,95%可信区间=0.58~1.30)。对心肌梗死患者分层分析显示,I1297D基因型和等位基因分布频率在心肌梗死组和对照组间差异无统计学意义(χ2=0.24,P=0.89;χ2=0.13,P=0.72)。Logistic回归校正性别、年龄、体重指数、吸烟、高血压、高脂血症、糖尿病等冠心病易患因素后,I1297D多态性在病例组和对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论连接蛋白37基因I1297D多态性与中国北方汉族人群早发冠心病易感性无明显关联。     

心源性肝硬化并罕见大量腹水1例

一、病例资料 患者女性，39岁，因反复乏力、腹胀5年，加重2月于2004年8月4日入院。患者1999年无明显诱因出现乏力、腹胀，当地医院诊断为“肝硬化、腹水”，保肝治疗后症状缓解。2000年初，症状加重于“华西医科大学附属医院”住院1月，具体诊断及治疗情况不详，出院时症状好转。     

乙型肝炎病毒基因变异、p16蛋白失活与肝癌的相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因变异及肿瘤抑制基因p16蛋白失活与肝癌发生的关系。方法用基因芯片和核苷酸序列分析技术对114例HBV感染者（观察组）血清和43份肝组织标本中HBV DNA（前C区1814、1896、BCP区1762、1764位）进行分析，用流式细胞荧光染色法检测观察组和20例正常献血者（正常对照组）外周血白细胞中p16蛋白表达。结果观察组慢性重症乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者血清HBV基因总突变率显著高于慢性乙型肝炎患者（P〈0．01），肝硬化、肝癌肝组织HBV基因总突变率显著高于正常组织；正常对照组外周血自细胞中p16蛋白阳性率显著低于慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者，肝硬化、肝癌患者阳性率显著高于慢性乙型肝炎患者。结论HBV变异可能是肝癌发生的始动因子，而p16蛋白失活是肝癌发生的重要因素。     

抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体阳性的肝病患者临床与实验室特征

目的研究肝功能异常伴抗可溶性肝抗原／肝咦抗原（SLA／LP）抗体阳性患者临床与实验室特点。方法收集肝功能异常患者血清5500例，分别完成相关自身抗体的检测。结果8例（0．15％）患者检测出sLA／LP抗体阳性，女性6例，以中老年女性为主，男性2例，年龄分别为27岁和33岁，8例中6例无甲、乙、丙、丁、戊型等病毒性肝炎现症感染证据，2例分别伴乙、丙型肝炎病毒标志物，无现症感染证据。8例中7例已发展至肝硬化，除sLA／LP抗体阳性外，抗核抗体均为阳性，部分患者伴抗平滑肌抗体，抗线粒体抗体，抗线粒体抗体亚型-丙酮酸脱氢酶复合物阳性。结论sLA／LP抗体在所检测患者中阳性率较低，以女性患者为主，多数临床与实验室特点符合自身免疫性肝炎特征，女性患者慢性肝病原因未名者应检测此抗体。     

汉滩病毒核蛋白部分片段与囊膜糖蛋白G1在昆虫细胞中的融合表达

目的　应用Bac -to -Bac杆状病毒表达系统融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白部分片段。方法　构建含有汉滩病毒G1S0 7嵌合基因的杆状病毒表达载体 pFBD -G1S0 7,转化DH10Bac致敏菌 ,利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至穿梭质粒Bacmid上 ,快速筛选出含有G1S0 7嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达该融合蛋白 ,利用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹对表达产物进行检测。结果　构建的含G1S0 7嵌合基因之重组杆状病毒可在昆虫细胞中表达出融合蛋白 ,该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1特异性单抗所识别 ,表达产物主要集中在细胞内。结论　在昆虫细胞中表达出具有生物学活性的G1S0 7融合蛋白 ,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础     

源于亲本株PRVFa的3个基因缺失病毒株PRV TK^-、PRV gE^-／gI^-和PRV TK^-／gE^-／gI^-抵抗强毒攻击的比较研究

目的 4周龄仔猪24头随机分成4个组(A、B、C和对照组),前3组中各5头分别对应接种对应的缺失毒力基因TK(A)、缺失毒力基因gE/gI(B)和缺失毒力基因TK/gE/gI(C)3个基因缺失株,接种剂量均为105PFU,留1头不接种作为同居猪.免疫14d后以107PFU PRV Fa株滴鼻攻毒所有试验猪, 7d后屠宰猪只,采集大脑、小脑、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、扁桃体、下颌淋巴结和三叉神经节,用光镜和电镜技术观察PRV攻毒后仔猪的器官损伤程度.收集免疫接种后3d内和强毒攻击后5d内的所有猪只鼻腔拭纸,以Southern blots方法测定PRV 的组织分布情况.结果 表明,收集的10种组织中出现病变的组织比例分别为:对照组为9/10,免疫A组为 4/10、B组为3/10、C组为4/10.病理学和超微病例观察表明,对照组和A组中肺脏损伤严重,其他组轻微;对照组中大脑、小脑、三叉神经损伤严重,免疫组轻微;A、B和C疫苗株对潜伏感染的主要靶器官扁桃体损伤程度依次加重.Southern blots分析表明,所有接种缺失病毒的试验猪均可通过鼻腔分泌物散毒,但是排出的病毒不能成功感染同居猪;A、B和C疫苗株免疫后均不能有效阻止PRV Fa 攻击后的散毒,但在仔猪大脑和小脑中不能检出病毒.结论 接种3个不同基因缺失株A、B和C均能阻止强毒株Fa 感染后向大脑和小脑的入侵,并减少强毒对多个器官的损害作用,其中C株的抗强毒感染能力和抗强毒所致损伤能力更佳.     

衰老大鼠心肌对缺血再灌注损伤的敏感性研究

目的观察衰老大鼠心肌对缺血再灌注损伤的敏感性,并探讨其可能的机制。方法成年和老年雄性Wistar大鼠各12只,分为4组：成年假手术组、成年缺血再灌注组、老年假手术组和老年缺血再灌注组,每组6只,进行缺血30 min再灌注3 h。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,比色法检测心肌组织半胱胺酸蛋白酶蛋白-3 (caspase-3)活性,化学发光法测定心肌组织总一氧化氮(NOx)含量,ELISA法检测心肌过氧亚硝基(ONOO~-)含量。结果老年组缺血再灌注引起心肌细胞凋亡的程度明显高于成年组,凋亡指数分别为(14．6±1.7)%、(19．0±2．1)%,差异有统计学意义(P＜0．05)；caspase-3活性：成年组为(340±32)μmol/mg,老年组为(436±35)μmol/mg,差异有统计学意义(P＜0．05)；心肌组织中NOx含量：成年缺血再灌注组、老年缺血再灌注组分别为成年假手术组的(2．1±0．2)、(4．4±0．5)倍,差异有统计学意义(P＜0．05)；ONOO~-含量：成年缺血再灌注组和老年缺血再灌注组分别为(4．68±0．15)nmol/g、(7．25±0．18)nmol/g,差异有统计学意义(P＜0．05)。结论老年大鼠对心肌缺血再灌注损伤的敏感性增加,可能的原因是老年鼠心脏中NO的毒性衍生物ONOO~-含量增加,从而导致功能蛋白的硝基化。